अधिशोषण-वर्णलेखन
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अधिशोषण वर्णलेखन सिद्धान्त के अनुसार किसी विशिष्ट अधिशोषक पर विभिन्न यौगिकों के अधिशोषण की मात्रा भिन्न-भिन्न होती है। जिसमे सिलिका जेल और ऐलुमिना सामान्यतः अधिशोषक के रूप में प्रयुक्त किए जाते हैं। स्थिर प्रावस्था (अधिशोषक) पर गतिशील प्रावस्था को प्रवाहित करने से मिश्रण के अवयव स्थिर प्रावस्था पर भिन्न-भिन्न दूरी तय करते हैं। किसी विशिष्ट अधिशोषक पर विभन्न यौगिक भिन्न अंशों में अधिशोषित होते हैं।
वर्णलेखन विधियों के प्रकार
निम्नलिखित वर्णलेखन विधियाँ विभेदी-अधिशोषण सिद्धान्त पर आधारित हैं:
(i) कॉलम-वर्णलेखन, अर्थात् स्तम्भ-वर्णलेखन
(ii) पतली परत वर्णलेखन।
कॉलम-वर्णलेखन, अर्थात् स्तम्भ-वर्णलेखन
कॉलम क्रोमैटोग्राफी एक अत्यधिक प्रारंभिक तकनीक है जिसका उपयोग यौगिकों को शुद्ध करने के लिए किया जाता है। कॉलम क्रोमैटोग्राफी को उनकी ध्रुवता के आधार पर शुद्ध करने के लिए किया जाता है। इस विधि में अणुओं के मिश्रण को एक मोबाइल चरण और एक स्थिर चरण के बीच उनके अंतर विभाजन के आधार पर अलग किया जाता है। जिसमे एक पाश्चर पिपेट का उपयोग स्तंभ के रूप में किया जाता है और सामान्यतः मिश्रण को अलग करने के लिए 1 ग्राम अधिशोषक (अर्थात सिलिका/एल्यूमिना) का उपयोग किया जाता है।
निम्नलिखित में से किसका उपयोग अधिशोषण क्रोमैटोग्राफी में अधिशोषक के रूप में नहीं किया जा सकता है?
- इस विधि में एक पाश्चर पिपेट और ~1 ग्राम सिलिका या एल्यूमिना ऑक्साइड लेते हैं।
- फिर पाश्चर पिपेट को इस प्रकार व्यवस्थित करतें हैं कि यह सीधा हो और इसे क्लैंप से सुरक्षित करें।
- अन्य पाश्चर पिपेट या तार का उपयोग करके पिपेट के आधार में थोड़ी मात्रा में कांच का ऊन डाला जाना चाहिए। यह किसी भी सूक्ष्म कण को अंदर जाने से रोकने के लिए किया जाता है।
- उसके उपरांत सिलिका को छोटे कीप के माध्यम से पिपेट में जोड़ा जाता है।
- इसमें सिलिका का शीर्ष समतल होना चाहिए। यदि सिलिका समतल नहीं है, तो पिपेट को किसी वस्तु पर धीरे से थपथपाएं कि यह समतल हो जाए (इस तकनीक को ड्राई लोडिंग कहते है)।
- प्रवाह दर को नियंत्रित करने के लिए स्टॉपकॉक बनाने के लिए आप एक छोटे क्लैंप वाले कॉलम का उपयोग कर सकते हैं।
नमूना लोड करने में सहायता के लिए स्तंभ के शीर्ष पर (लगभग 2 मिमी ऊंची) थोड़ी मात्रा में रेत डाली जा सकती है (यह नमूना को स्तंभ के माध्यम से आसानी से जाने में मदद करेगा)। इस मामले में शीर्ष पर रेत की परत भी समतल होनी चाहिए। इसमें प्रयोग किये गए विलायक का उपयोग कॉलम को गीला करने के लिए किया जाता है। यह कॉलम (गीली लोडिंग) को कॉम्पैक्ट करने में मदद करता है। प्रयोग समाप्त होने तक इसकी सतह को गीला रखना चाहिए।
पतली परत वर्णलेखन
पतली परत क्रोमैटोग्राफी एक अन्य प्रकार की अधिशेषण क्रोमैटोग्राफी है। इस विधि में कांच की प्लेट पर लेपित अधिशोषक की पतली परत के ऊपर कई पदार्थों के मिश्रण का पृथक्करण किया जाता है। मिश्रण के प्रत्येक घटक के सापेक्षिक अधिशोषण को उसके मंदता कारक (Rf) (प्रतिधारण कारक) के रूप में व्यक्त किया जाता है।
- कांच की प्लेटों को सिलिका जेल (SiO2) की एक समान परत से लेपित किया जाता है।
- इस विधि में घुले हुए नमूने को प्लेट पर रखा जाता है, और उस प्लेट को एक स्क्रू-टॉप जार में रख दिया जाता है इसमें विलायक और फिल्टर पेपर का एक टुकड़ा रखा होता है।
- जब विलायक प्लेट के शीर्ष के करीब पहुंचता है, तो प्लेट को हटा दिया जाता है, उसके बाद प्लेट को सुखाया जाता है और यूवी प्रकाश का उपयोग करके देखा जाता है।
- इस प्रोटोकॉल पर विविधताओं का उपयोग विभिन्न उद्देश्यों के लिए किया जाता है, जिसमें नमूने का पूर्व-उपचार करना, सॉर्बेंट, प्लेट सामग्री, विलायक प्रणाली, विकास तकनीक, और पता लगाने और विज़ुअलाइज़ेशन की विधि को सम्मिलित है।
