पॉलिमरेज श्रृंखला अभिक्रिया

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पॉलिमरेज श्रृंखला अभिक्रिया (पीसीआर) एक आणविक जीव विज्ञान तकनीक है जिसका उपयोग डीएनए के एक विशिष्ट खंड को बढ़ाने के लिए किया जाता है, जिससे कम समय में वांछित डीएनए अनुक्रम की लाखों से लेकर अरबों प्रतियाँ बनती हैं। यह आनुवंशिक अनुसंधान, फोरेंसिक विज्ञान, निदान और जैव प्रौद्योगिकी में एक महत्वपूर्ण उपकरण है।

पीसीआर में चरण

पीसीआर में तीन मुख्य चरण शामिल हैं जिन्हें डीएनए को बढ़ाने के लिए चक्रों में दोहराया जाता है:

1. विकृतीकरण (94-96 डिग्री सेल्सियस):

  • डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए को बेस पेयर के बीच हाइड्रोजन बॉन्ड को तोड़ने के लिए उच्च तापमान पर गर्म किया जाता है।
  • इसके परिणामस्वरूप डीएनए स्ट्रैंड को सिंगल स्ट्रैंड में अलग किया जाता है।

2. एनीलिंग (50-65 डिग्री सेल्सियस):

  • प्रतिक्रिया मिश्रण को ठंडा किया जाता है, जिससे छोटे, सिंगल-स्ट्रैंडेड डीएनए प्राइमर लक्ष्य डीएनए पर अपने पूरक अनुक्रमों से बंध जाते हैं (एनील होते हैं)।
  • प्राइमर छोटे सिंथेटिक डीएनए अनुक्रम होते हैं जिन्हें लक्ष्य डीएनए क्षेत्र को फ़्लैंक करने के लिए डिज़ाइन किया जाता है।

3. विस्तार/विस्तार (72°C): एंजाइम टैक डीएनए पॉलीमरेज़ प्राइमर में 5’ से 3’ दिशा में न्यूक्लियोटाइड (dNTPs) जोड़कर एक नया डीएनए स्ट्रैंड संश्लेषित करता है। यह चरण प्रत्येक चक्र के बाद डीएनए की मात्रा को दोगुना कर देता है।

पीसीआर के घटक

टेम्पलेट डीएनए: प्रवर्धित किए जाने वाले लक्ष्य अनुक्रम वाले डीएनए। प्राइमर: लक्ष्य क्षेत्र के पूरक लघु, एकल-स्ट्रैंडेड डीएनए अनुक्रम।

टैक डीएनए पॉलीमरेज़: थर्मस एक्वाटिकस से प्राप्त एक ऊष्मा-स्थिर एंजाइम

dNTPs: डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड ट्राइफॉस्फेट (A, T, G, और C) नए डीएनए स्ट्रैंड के लिए बिल्डिंग ब्लॉक के रूप में उपयोग किए जाते हैं।

बफर समाधान: एंजाइम के कार्य करने के लिए इष्टतम pH और आयनिक शक्ति बनाए रखता है।

पीसीआर के अनुप्रयोग

  • फोरेंसिक विज्ञान: पहचान के लिए अपराध स्थलों से डीएनए का प्रवर्धन।
  • चिकित्सा निदान: आनुवंशिक रोगों, रोगजनकों (जैसे, एचआईवी, कोविड-19) का पता लगाना।
  • आनुवंशिक इंजीनियरिंग: जीन की क्लोनिंग और पुनः संयोजक डीएनए का उत्पादन करना।
  • अनुसंधान: विशिष्ट जीन या डीएनए अनुक्रमों का विस्तार से अध्ययन करना।
  • कृषि: आनुवंशिक रूप से संशोधित जीवों (जीएमओ) का पता लगाना।

पीसीआर के लाभ

  • उच्च संवेदनशीलता: एक अणु से भी डीएनए को प्रवर्धित कर सकता है।
  • गति: कुछ घंटों में अरबों डीएनए प्रतियाँ बनाता है।
  • विशिष्टता: प्राइमर सुनिश्चित करते हैं कि केवल लक्ष्य डीएनए अनुक्रम को ही प्रवर्धित किया जाए।

अभ्यास प्रश्न

वस्तुनिष्ठ प्रश्न /MCQs:

पीसीआर में इस्तेमाल किया जाने वाला एंजाइम है:

a) हेलीकेस

b) टैक डीएनए पोलीमरेज़

c) डीएनए लिगेज

d) आरएनए पोलीमरेज़

पीसीआर में एनीलिंग चरण के लिए तापमान आमतौर पर होता है:

a) 94–96°C

b) 72°C

c) 50–65°C

d) 37°C

पीसीआर में प्राइमर का मुख्य उद्देश्य है:

a) डीएनए संश्लेषण के लिए न्यूक्लियोटाइड प्रदान करना।

b) प्रतिकृति आरंभ करने के लिए लक्ष्य डीएनए अनुक्रम से जुड़ना।

c) डीएनए को विकृत करना।

d) प्रतिक्रिया का पीएच बनाए रखना।

पीसीआर का उपयोग किया जाता है:

a) पूरे गुणसूत्रों को क्लोन करना।

b) विशिष्ट डीएनए अनुक्रमों को बढ़ाना।

c) आरएनए को डीएनए में बदलना।

d) कोशिकाओं में प्रोटीन का पता लगाना।

निम्नलिखित में से कौन पीसीआर प्रतिक्रिया का घटक नहीं है? a) टेम्पलेट DNA

b) Taq DNA पोलीमरेज़

c) प्राइमर

d) राइबोसोम

लघु उत्तर प्रश्न:

  • PCR क्या है, और यह जैव प्रौद्योगिकी में क्यों महत्वपूर्ण है?
  • PCR के तीन चरणों का वर्णन करें।
  • PCR में Taq DNA पोलीमरेज़ का उपयोग क्यों किया जाता है?
  • फोरेंसिक विज्ञान में PCR के अनुप्रयोग क्या हैं?
  • PCR में प्राइमर की भूमिका की व्याख्या करें।

दीर्घ उत्तर/वर्णनात्मक प्रश्न:

  • एक लेबल वाले आरेख के साथ PCR के सिद्धांत और चरणों की व्याख्या करें।
  • PCR के लिए आवश्यक घटकों और उनकी भूमिकाओं पर चर्चा करें।
  • PCR चिकित्सा निदान और आनुवंशिक अनुसंधान में कैसे योगदान देता है?
  • पारंपरिक DNA प्रवर्धन विधियों की तुलना में PCR के क्या लाभ हैं?